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  • 你的細菌培養物還在增長嗎?引物在OD-600進行測量

    細菌生長曲線綜述,讓我們先回顧一下細菌生長曲線的4個基本階段:log階段,滯后階段,靜止階段和死亡階段(圖1)。在此期間,細胞正在適應和調整他們的新環境。然后,培養進入對數期,在此期間,細胞迅速分裂,數量翻倍(大腸桿菌在對數期每20分鐘翻一番)。當你在液體培養液中達到最大的細胞密度時,細胞就進入了靜止期。在這一階段,細胞數量沒有整體增加——死亡的細胞被新分裂的細胞所取代,但活細胞的總數保持不變。如果你在研究孢子形成細菌,這可能是營養細胞孢子形成的階段,或形成新的孢子。最后,死亡(或下降)階段是由多種因素引起的,包括營養或氧氣的缺乏,細胞代謝引起的介質pH值的變化,或有毒細胞廢物的積累。?使用OD600確定您的文化處于什么階段?最簡單的方法是測量OD600,或600納米的光密度,來測量一個培養基在其生長曲線上的距離。這種波長是專門為細菌OD測量而選擇的,因為與紫外線波長不同,600nm對培養物無害。這種波長通常也不會被像TSB和LB這樣的黃色介質吸收。通過監視OD600的增長速度,您可以確定培養物的滯后、記錄和固定相。?那么如何測量呢?對于一個簡單的懸浮在液體中的細胞,你首先需要零或“空白”的分光光度計與新鮮的,未接種的媒介減去媒介對測量的任何吸收貢獻。然后,取您的文化樣本并測量OD600。這種測量方法可以很容易地計算出培養瓶中每毫升培養細胞的總數。還不錯吧?盡管如此,還是有一些事情需要注意:?當你提取一個培養基樣本時,確保你混合的很好,并立即進行測量,因為細胞可以在一分鐘左右的時間內開始沉淀,這將導致不準確的結果。?如果細菌在溶液中形成生物膜或聚集物,這將嚴重影響測量的準確性和精度。在這種情況下,您可能需要對培養物進行聲波降解或進一步處理,以分解這些“簇”。查閱有關您正在使用的菌株的文獻,以避免或消除這個問題。?最重要的是,>1的OD值不準確!這樣高的OD讀數超出了大多數分光光度計的動態范圍,這意味著這些讀數不會隨著細胞濃度的增加而線性增加。如果你得到的OD值大于1,稀釋你的樣品2倍或更多直到它達到OD600<1。?如果你經常用燒瓶培養細菌,訓練自己用眼睛估計OD值是有幫助的。這樣,當燒瓶明顯不在您正在尋找的OD范圍內時,跳過OD600檢查可以節省寶貴的時間。查看本文了解更多信息,并考慮使用微板閱讀器來提高OD測量的吞吐量。?其他監測生長和代謝的方法?雖然使用一種培養物的OD600來監測生長是一種久經考驗的真實方法,但是還有其他幾種方法來評估細菌培養物的生長和代謝。您可能會發現其中一些因素對于您的特定應用程序也更相關或有用!?通過采集培養物的樣本并在顯微鏡下進行檢查,你可以開始對培養物中活細胞的近似濃度有一個了解。額外的好處:你可以比較細胞的圖片,看看是否有不同的形態學批次,或多少營養細胞在一個孢子形成培養。?溶解氧和二氧化碳??紤]啤酒(由酵母制成),康普茶(由酵母和各種細菌制成),以及其他由微生物發酵的飲料。在這些例子中,隨著發酵的進行,氧氣(O2)被消耗,二氧化碳(CO2)被形成。同樣的過程發生在有氧培養的細菌培養中!溶解O2和CO2探頭是生物反應器中常用的探頭。如果你想要一個微創的選擇,光學傳感器(和補丁)存在,使用LED熒光監控溶解-2從外面瓶啊!?大多數細菌隨著時間的推移會降低培養基的pH值,包括大腸桿菌。對于某些物種來說,酸的產生實際上會限制一個文化的最大生長和生存能力。與氧傳感器一樣,有方法可以對燒瓶中的pH值進行無創連續監測。?糖的分析。有了某些儀器,從生長培養基中快速可靠地測定殘余糖分是可能的。例如,如果你的培養基中主要的碳源是葡萄糖,在細菌生長的中途獲取葡萄糖測量數據可以讓你了解培養基在生長曲線中的位置。?那么你應該在什么時候收獲一種文化呢??簡而言之,這完全取決于文化的最終目標是什么。例如,我曾經大量培育和誘導大腸桿菌過度表達非本地蛋白,然后從培養中純化。我經常發現,我從培養物中獲得的蛋白質的質量和數量取決于我收獲時的相細胞。然而,在其他情況下,目標只是盡可能多的獲取細胞。?一旦你知道了需要采集細胞的特定生長階段,一定要進行一些測試(包括測量),以確保你對細菌生長時間的評估是正確的。這將給你一個強烈的感覺,你的文化需要多長時間準備收獲,并提供歷史數據比較增長曲線。始終從一個較小的“種子”文化開始,以獲得可靠的和持續增長的燒瓶。最后,如果你不太適應減少污染的風險,可以測試你的細胞培養技術幾次。

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    離心管的介紹及使用規范

    離心管英文名稱:centrifugaltube定義:管狀試樣容器,可帶密封蓋或壓蓋。所屬學科:機械工程(一級學科);實驗室儀器和裝置(二級學科);實驗室離心機-實驗室離心機零部件及附件(三級學科)??按照大小大量離心管(500mL、250mL)普通離心管(50mL、25mL、15mL、10mL)微量離心管(2mL、1.5mL、0.65mL、0.2mL、5mL、7mL、0.5mL)?按照材料塑料離心管,玻璃離心管,鋼制離心管1、塑料離心管塑料離心管的優點是透明或者是半透明的,它的硬度小,可用穿刺法取出梯度。缺點是易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,使用壽命短。塑料離心管都有管蓋,它的作用是防止樣品外泄,尤其是用于有放射性或強腐蝕性的樣品時防止樣品外泄是很重要的一點;管蓋還有一個作用是防止樣品揮發以及支持離心管,防止離心管變形。在挑選這一點的時候還要注意檢查管蓋是否嚴密,在試驗時能否蓋嚴,以到達倒置不漏液;我們都知道在塑料離心管中,常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等,其中聚丙烯PP管性能會相對較好,所以,我們在挑選塑料離心管時盡可能的考慮聚丙烯的塑料離心管。2、玻璃離心管使用玻璃管時離心力不宜過大,需要墊橡膠墊,防止管子破碎,高速離心機一般不選用玻璃管。離心管蓋子封閉性不夠好,液體就不能加滿(針對高速離心機且使用角轉子)以防外溢,失去平衡。外溢后果是污染轉子和離心腔,影響感應器正常工作。超速離心時,液體一定要加滿離心管,因為超離需要抽高真空,只有加滿才能避免離心管變形。3、鋼制離心管而鋼制離心管強度大,不變形,能抗熱,抗凍,抗化學腐蝕,它的應用也是相當廣泛但使用時同樣也應避免接觸強腐蝕性的化學藥品,如強酸、強堿等。盡量避免這些化學物質的腐蝕。管蓋的作用:1、用于有放射性或強腐蝕性的樣品時,防止樣品外泄?!?、防止樣品揮發?!?、支持離心管,防止離心管變形。在生物科學,特別是生物化學和分子生物學研究領域,已得到十分廣泛的應用,每個生物化學和分子生物學實驗室都要準備多種型式的離心機。離心技術主要用于各種生物樣品的分離和制備,生物樣品懸浮液盛放在離心管中在高速旋轉下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒(如細胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,從而與溶液得以分離?;驹恚寒斠粋€粒子(生物大分子或細胞器)在高速旋轉下受到離心力作用時,此離心力“F”由下式定義, 即: F=ma=mω2r a—粒子旋轉的加速度,m—沉降粒子的有效質量,ω—粒子旋轉的角速度,r—粒子的旋轉半徑(cm)?!⊥ǔkx心力常用地球引力的倍數來表示,因而稱為相對離心力“RCF”?;蛘哂脭底殖恕癵”來表示 例如25000×g,則表示相對離心力為25000。

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